بررسي پارامتر های موثر در تغلیظ فرآورده ايمونوگلوبولين Anti-Rh(D)توسط سیستم اولترافيلتراسيون
1مریم هاشمی،2 محمود رضا جعفری، 3نرجس باران زاده،*4عبدالرضاوارسته
چکیده
هدف
ایمونوگلوبولین Anti-Rh (D) جهت پيشگيري از توليد آنتي بادي هاي Anti-Rh در افراد با Rh منفي كه در معرض گلبولهاي قرمز Rh مثبت قرارگرفته اند؛ استفاده مي شود. فرایندهای تخلیص و آماده سازی این نوع فراورده تاثیر مستقیم بر طول عمر آن دارد. از طرفي با توجه به آن که محلولهای رقیق پروتئينی خارج شده از ستونهای کروماتوگرافی به علت اتصال به سطوح و تجزیه به زیر واحدهای متشکله، پایدار نیستند؛ لذا معمولا بعد از استخراج نیاز به تغلیظ دارند. هدف از اين مطالعه تغليظ فرآورده (Anti-Rh(D با استفاده از سيستم اولترافيلتراسيون وبررسي شرایط مناسب برای فرایند تغليظ است.
مواد و روش کار
جهت مطالعه پارامترهای مختلف موثر در تغلیظ ایمونوگلوبولین ( Anti-Rh(Dتوسط روش اولترافیلتراسیون، مقدار ml 100 فرآورده خالص شده، به همراه گلایسین M3/0 و غلظت های مختلف سوکروز(mM90و60،30) به وسیله سیستم Minitan-S که فيلتر آن از نوع Polysulfon با cut off معادل30000 دالتون است؛ به مدت 50 دقیقه و تا حجم ml 27، تغلیظ شد. روش جریان آب تمیز جهت تعیین سرعت مناسب پمپ، روش برادفورد جهت تعین پروتئين تام موجود در محلولی که از فیلتر عبور کرده، روش SRID (Single Radial Immunodiffusion) جهت بررسی میزان IgG تام نمونه، قبل و بعد از تغلیظ، ژل فیلتراسیون برای بررسی میزان مولکولهای IgG تجمع یافته و شکسته شده و روش (Enzyme-Linked Antiglobulin Test) ELAT جهت تعیین میزانIgG اختصاصی(Anti-Rh (D مورد استفاده قرار گرفت.
نتایج
نتایج نشان داد که تحت شرایط ذکر شده، تقريباً مقدار بسيار ناچيزي پروتئين از فيلتر عبور مي کند كه مي توان از آن صرف نظر نمود. غلظت IgGتام نیز قبل و بعد از تغلیظ تقریبا یکسان است. در روش ژل فیلتراسیون وبا استفاده از ستون سفادکس G-200،میزان مولکول های تجمع یافته و شکسته شده در نمونه تغلیظ شدهIgG، به ترتیب 3/2 و 5/2 درصد و IgGمونومرنیز، 95 درصد به دست آمد. بررسي ميزان Anti-Rh (D)نمونه های اولترافيلتر شده تحت فرمولاسیونهای مختلف توسط روش ELATنيز، بيانگر آن بود كه در نمونه تغلیظ شده و بدون فرمولاسیون (Anti-Rh (D به میزان 2/8% کاهش یافته است. در فرمولاسیون هائی که حاوي M 3/0گلايسين و30، 60 و 90 mM سوكروز در بافر سديم- پتاسيم فسفات mM25 pH 5/7 است به ترتیب 6/1%، 7/0% و 3/2% كاهش در میزان Anti-Rh (D) مشاهده شد.
نتیجه گیری
با توجه به نتایج حاصل از این مطالعه، که سیستم اولترافیلتراسیون تحت شرایط ذکر شده برای تغلیظ (Anti-Rh(D روشی مناسب است. به منظور جلوگيري از دناتوراسيون پروتئين تحت فشار سيستم اولترافیلتراسیون در طی فرایند تغلیظ، مطلوب است که پايداركننده هائي همچون گلايسين و سوكروز را قبل از عمل تغليظ به فراورده اضافه نمود.
كلمات كليدي:Anti-Rh(D ) ، اولترافيلتراسيون، فعاليت بيولوژيكي،ELAT ، پایداری، ایمونوگلوبولین.
1 - دانشجویPhD بیوتکنولوژی، دانشکده داروسازی، دانشگاه علوم پزشکی مشهد
2 - دانشیار داروسازی صنعتی، گروه فارماسيوتيکس و مرکز تحقيقات بيوتکنولوژی، دانشکده داروسازی، دانشگاه علوم پزشکی مشهد
3 - دکترای عمومی داروسازی
4 - دانشیار ایمونولوژی، مرکز تحقیقات ایمونولوژی، پژوهشکده بوعلی، دانشگاه علوم پزشکی مشهد
* نويسنده مسئول: تلفن: 7112410– 0511، varasteha@mums.ac.ir
مجله علوم پايه پزشکی ايران
